蛋白純化雜志

Ⅰ 關於液相色譜法純化蛋白質

凝膠過濾色譜法： 解析度較高，但是上樣量僅為柱體積的1%，而且對流速也有嚴格的限制
離子交換色譜法：根據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質，但是解析度沒有凝膠過濾高
親和層析法： 根據生物分子的特異性分離目的蛋白，特異性很高，但是配件容易丟失 適合含有特異性的標簽的或者抗體
疏水色譜：根據疏水性來分離蛋白質，缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低，所以應用范圍受到限制，適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質

Ⅱ 蛋白質分離純化技術中哪些與它的等電點有關試述這些技術分離純化的原理

主要有：
等電聚焦：使電泳的介質中形成一定范圍的pH梯度，電泳時待分離的兩性分子可以在這種pH梯度中遷移，直到聚集於與其等電點相同的區域。該技術特別適用於分子量相近而等電點不同的蛋白質分離和分析。
等電點沉澱：利用兩性電解質在等電點時溶解度最低，以及不同兩性電解質等電點不同的特性，通過調節溶液PH，使蛋白質或雜志沉澱析出，從而使蛋白質與雜質分離。
層析聚焦：將蛋白質等兩性電解質的等電點的特性和層析的特性結合在一起，實現分離的技術。
等電點結晶：通過緩慢改變蛋白質溶液的PH，使之逐漸達到等電點，而使蛋白質結晶析出，從而得到純化。

Ⅲ 蛋白過鎳柱純化的過程 我是初學者，所以麻煩大家給的詳細一點 謝謝啦！

見http://..com/question/292063616.html或
鎳柱分離純化
固定金屬離子親和柱主要用於金屬螯化離子。位於許多蛋白中的組氨酸殘基將會和許多金屬離子，例如鋅。銅，鎳，鐵等形成復合物。因此，該柱料能選擇性螯合一些具有組氨酸殘基的蛋白質。但是半胱氨酸和咯氨酸殘基也能和固定化金屬螯和。但是親和力比組氨酸要弱。所以，結合的強度是和緩沖液的PH和金屬離子決定的。
金屬螯和柱料主要是由亞氨基的乙醯乙酸成分耦聯瓊脂糖柱料，藉助醚長生7個原子的空間。
全部容量：24-30um的含有zn的干膠
柱料結構：6%的高鉸鏈的瓊脂糖
柱料大小：45-165um
平均微粒：90um
直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小時可達700厘米
最大壓強：0.3MPa
PH變化：長期3-13
短期2-14
化學穩定：通用含水緩沖液
0.01M鹽酸，1.0M NAOH, 20%乙醇（保存7天）
物理性質：可以忽略在PH或者離子變化下的體積變化
耐熱性能：121度下0.1M乙酸鈉作用半小時
金屬螯和柱料保存於事先填充於20%乙醇。所以要攪拌驅除20%乙醇溶液。換成去離子水。比例是25%去離子水和75%處理膠。
處理金屬螯和柱料：
1 平衡所有用到的材料於室溫。
2 攪拌金屬螯和柱料
3 倒水進柱子，驅除氣體。用無離子水液封幾厘米。
4 將金屬螯和柱料連續倒進柱子，用玻璃棒支撐柱壁防止氣泡形成。
5 然後立即用無離子水液封，裝上柱蓋，連接上泵。
6 打開柱子底部的開關，然後調節泵的流速。通常是不超過0.3MPa的。
7 經過一個穩定的柱床填鴨後，維持填壓速度為3個柱床。
使用adaptor
1 經過上溯填鴨後，關閉柱床下面開關，移開上面的薄膜，小心的加上去離子水進行液封。
2 一定角度插入adaptor，確保沒有氣泡。
3 確保所有的連接都沒有問題，柱子/泵/樣品接受器
4 傾斜插入活塞確保沒有氣泡和管道充滿液體。利用活泵正反向的流動確保沒有氣泡。
5 固定adaptor，打開柱子開關，開始緩沖液的流動。先以填鴨的速度直到柱床穩定後。

固定金屬離子：
金屬螯和柱料通過水來螯和金屬的，避免發生沉澱在膠上。
1 確保柱子已經平衡好。如果有必要可以洗2個柱床（去離子水）
2 選擇金屬離子和0.1-0.3M中弱性酸。例如鐵離子PH 3左右就好，避免形成沉澱和共沉。
3 加入一倍柱床的金屬離子溶液
4 5倍柱床的去離子水洗滌
5 至少2倍柱床的平衡緩沖液
結合：
發生於PH5.5-8.5之間.最強反映發生於最後
初始緩沖液的選擇決定於金屬離子和樣品的結合性質。乙酸鈉或者磷酸鈉是比較好的緩沖液中不能使用EDTA或者檸檬酸鹽
最通用緩沖液：
0.01-0.2M磷酸鈉
0.05M乙酸鈉
強烈推薦加入0.15-0.5M NaCl用於防止離子交換。
通常如果不知道一個蛋白的結合能力，最好的就是使用鋅離子和中性的磷酸或者乙酸鹽，同時含有0.15-0.5M NaCl
去垢劑不會影響蛋白質的結合能力
金屬離子的取代意味著蛋白發生了結合。這種現象可以通過顏色來決定
洗脫蛋白：（3種方法）
1 降低PH(一步或者分步)，大部分蛋白溶解於PH4-6最終3-4是可容的。可選擇檸檬酸鹽，磷酸或者乙酸鹽。
2 逐步提高咪唑的濃度（0-0.5M），梯度變化最好是在初始緩沖液的PH范圍。
3 加入EDTA或者EGTA可洗脫蛋白質。但是不是通用的。
利用離心或者重力作用純化組氨酸位點蛋白
通過上鎳進行選擇性結合含有組氨酸位點蛋白，然後利用含有咪唑的緩沖液洗脫蛋白。

以下的實驗是為了最大化將組氨酸位點蛋白結合到金屬螯和柱料，然後確保能夠洗脫下來。當結合和洗脫的條件尚未明了時，這些方法也是很好用的。
為了獲得高純度的蛋白，必須摸索咪唑的緩沖液在樣品上柱和洗脫時的濃度。通常使用10mM-500mM范圍的咪唑的緩沖液進行剃度洗脫，然後通過收集和SDS-PAGE 蛋白電泳確定洗脫濃度。
為了純化不可容的含有his位點的蛋白質，（包含體），可以在變性條件下進行。利用8M尿素或者6M鹽酸呱進行溶解蛋白。
樣品處理：
樣品要經可能溶解，避免出現堵塞現象，所以可以利用0.45uM慮膜過濾雜志
如果樣品時溶解於20mM磷酸緩沖液中（含有0.5M Nacl,PH7.4），必須調整PH到7－8。
上柱前准備：
洗柱料：
1 親柔震動膠瓶充旋膠料
2 利用吸管吸出足量柱料用以純化目的。每毫升柱料可以吸納5毫克蛋白
3 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
4 小心去除上清
5 加入5倍體積去離子水，充分振盪柱料。可以倒置來回5分鍾，不要機械攪拌。
6 再次500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
7 再次小心去除上清
掛鎳：
1 加入0.5倍柱床體積0.1M硫酸鎳，充分振盪柱料。可以倒置來回5分鍾，不要機械攪拌。
2 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
3 小心去除上清
洗柱：
1加入5倍體積去離子水，充分振盪柱料，來回倒置5分鍾
2 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
3小心去除上清
4 再洗兩次柱料（一共3×5柱床去離子水）
5 最後用一倍體積起始緩沖液充旋柱料（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）

利用離心來純化：
上樣：
1 在起始緩沖液中加入樣品，然後使整體膠濃度達到50％
2 親柔攪拌，室溫離心5－30分鍾，結合能力取決於蛋白和樣品濃度。
3 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
4 取出上清。部分用於SDS-PAGE 蛋白電泳
洗膠：
1 加入5倍體積起始緩沖液，攪拌5分鍾
2 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
3取出上清。部分用於SDS-PAGE 蛋白電泳
4再洗兩次柱料（一共3×5柱床起始緩沖液）。記得取出上清，部分用於SDS-PAGE 蛋白
電泳
洗柱：
1 加入2倍體積洗脫緩沖液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）攪拌5分鍾
2再次500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
3再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脫緩沖液）。記得取出上清，部分用於SDS-PAGE 蛋白電泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN
利用流速和重力純化：
1 在柱子底部加上濾器
2 加水排氣
3 加柱帽，去除殘余水。推薦是最多2 Ml柱料就可以了
樣品結合：
1 倒膠進入柱子
2 小心上樣，用波棒室溫攪拌5－30分鍾
3 打開柱帽，收集流出峰用於分析
洗膠：
1 加入5倍體積起始緩沖液，收集流出液用於SDS-PAGE 蛋白電泳
2再洗兩次柱料（一共3×5柱床起始緩沖液）。記得取出上清，部分用於SDS-PAGE 蛋白
電泳
洗柱：
1 加上柱帽，加入2倍體積洗脫緩沖液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）攪拌5分鍾。打開柱帽，收集流出峰
2再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脫緩沖液）。記得取出上清，部分用於SDS-PAGE 蛋白電泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN
注意：0.5M咪唑的280nM吸光值＝0.5
常見問題：
1 樣品太粘稠
答：核酸存在影響，可以繼續超聲，加入RNA酶至10ug/ml DNA酶至5ug/ml。然後冰浴1
0－15分鍾。或者也可以用注射器來回充旋。這樣可以防止堵塞柱料。
2 平衡時樣品洗脫了下來
答: 檢查PH和緩沖液成分，如果緩沖液成分不正確，EDTA加入，強還原劑加入，都會導致這個現象出現。
加大膠的量，如果膠料承載能力過頭，也繪出出現這現象。
准備新鮮的柱料，如果柱料斷裂，也掛不上蛋白。
3 在洗脫液中不含有組氨酸蛋白
答：如果SDS-PAGE 蛋白電泳已經發現蛋白存在於超聲液中
超聲可能不完全。可以用顯微鏡觀察超聲情況。AD260/280比值。（通常是超聲前將10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCL，PH6-8），避免發泡以降解融合蛋白。
蛋白可能是是包含體，可以使用4－6M鹽酸呱或者4－8 M尿素溶解。
尿素溶解的可以進行SDS-PAGE 蛋白電泳，鹽酸呱溶解的不可以進行SDS-PAGE 蛋白電泳，必須換緩沖液。
洗脫液濃度太稀，可以加大咪唑濃度或者降低PH 來決定最佳洗脫條件如果在平衡前的洗柱發現了目的蛋白，證明起始緩沖液中的咪唑濃度太高，可適當降低。
4 考馬氏亮藍或者銀染發現多條帶
答：加入蛋白激酶抑制劑。可能是蛋白降解。用凝血酶切割前必須去除絲氨酸蛋白酶抑制劑採用梯度咪唑來洗脫蛋白。在平衡洗脫液中加入10mM咪唑可以洗脫大量雜質而不會洗脫融合蛋白。低於500mM咪唑可以洗掉絕大部分雜質。
在洗脫步奏往起始緩沖液加入去垢劑（2％TRITON x-100或者2％Tween20）50% 葡萄糖，20mM B-巰基乙醇。記得雜質通常沒有特意結合能力，可以改變緩沖液來洗脫。
如果雜志和目的蛋白有相同結合能力，那就不能用於純化。因此可以使用別的純化系統，例如含有GST尾巴就用谷胱甘肽瓊脂糖4B
柱料再生，清潔和保存
柱料再生：
1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl來洗脫鎳離子。然後用3柱床的0.5M NaCl來洗干凈EDTA
2如果是鐵離子可以用0.05M EDTA泡過夜
3 這一步可以洗脫上面未能洗脫的殘余結合蛋白
清洗柱料：
1 0.5倍柱床2M NaCl，反向洗脫10－15分鍾
2 1M NaOH洗1小時去除殘余蛋白
3 每一步都要用3倍柱床起始緩沖液清洗
4 4倍柱床70%乙醇洗脫強親水蛋白和脂類蛋白。
也可以使用2倍柱床去垢劑。0.1-0.5%非離子去垢劑溶於0.1M乙酸。浸泡1－2小時。最後用5個柱床的70％乙醇去除去垢劑。
清潔：
1 盡可能去除微生物
2 0.5-1M NaOH反向流動半小時
3 再用3－5倍柱床消毒的起始緩沖液平衡
4 這個清潔步奏不一定能夠提高純化能力
保存：
長期保存於20％乙醇或者0.01M NaOH 於4度

以上來自網路文庫，希望能幫到你。

Ⅳ 酶的分離純化和基因鑒定投什麼期刊

酶分離純化的一般原則是：保證酶的活性正常保持，不失活，避免在極端條件下操作，如有必要還要添加一定的保護劑。
雖然酶大多是蛋白質，但少數具有生物催化功能的分子並非為蛋白質，有一些被稱為核酶的RNA分子也具有催化功能。此外，通過人工合成所謂人工酶也具有與酶類似的催化活性，包括人工合成的DNA。 有人認為酶應定義為具有催化功能的生物大分子，即生物催化劑。
酶的催化活性會受其他分子影響：抑制劑是可以降低酶活性的分子；激活劑則是可以增加酶活性的分子。有許多物和毒就是酶的抑制劑。酶的活性還可以被溫度、化學環境（如pH值）、底物濃度以及電磁波（如微波）等許多因素所影響。

Ⅳ 推薦微生物方面的外文期刊，影響因子要高一些的，最好有排名。用來找文獻用的，不是投稿

你可以在ISI web of knowledge網站上查，都是SCI收錄的期刊。期刊的影響因子都可以查到。例如：APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY影響因子3.8，ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY影響因子5.8，JOURNAL OF BACTERIOLOGY影響因子3.8

Ⅵ 中國有哪些英文雜志關於細菌基因的克隆表達蛋白純化的

先對蛋白質測序，只要測頭尾七八個氨基酸，然後翻譯出其基因並據此合成引物，然後從基因文庫中PCR即可 通過westen雜交，確定純化蛋白質所在的基因的位置。

Ⅶ 可溶性蛋白的純化方法...詳細的，我的用的無血清培養基，帶His標簽，問下怎麼純化，感謝

用鎳柱鎳柱分離純化
固定金屬離子親和柱主要用於金屬螯化離子。位於許多蛋白中的組氨酸殘基將會和許多金屬離子，例如鋅。銅，鎳，鐵等形成復合物。因此，該柱料能選擇性螯合一些具有組氨酸殘基的蛋白質。但是半胱氨酸和咯氨酸殘基也能和固定化金屬螯和。但是親和力比組氨酸要弱。所以，結合的強度是和緩沖液的PH和金屬離子決定的。
金屬螯和柱料主要是由亞氨基的乙醯乙酸成分耦聯瓊脂糖柱料，藉助醚長生7個原子的空間。
全部容量：24-30um的含有zn的干膠
柱料結構：6%的高鉸鏈的瓊脂糖
柱料大小：45-165um
平均微粒：90um
直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小時可達700厘米
最大壓強：0.3MPa
PH變化：長期3-13
短期2-14
化學穩定：通用含水緩沖液
0.01M鹽酸，1.0M NAOH, 20%乙醇（保存7天）
物理性質：可以忽略在PH或者離子變化下的體積變化
耐熱性能：121度下0.1M乙酸鈉作用半小時
金屬螯和柱料保存於事先填充於20%乙醇。所以要攪拌驅除20%乙醇溶液。換成去離子水。比例是25%去離子水和75%處理膠。
處理金屬螯和柱料：
1 平衡所有用到的材料於室溫。
2 攪拌金屬螯和柱料
3 倒水進柱子，驅除氣體。用無離子水液封幾厘米。
4 將金屬螯和柱料連續倒進柱子，用玻璃棒支撐柱壁防止氣泡形成。
5 然後立即用無離子水液封，裝上柱蓋，連接上泵。
6 打開柱子底部的開關，然後調節泵的流速。通常是不超過0.3MPa的。
7 經過一個穩定的柱床填鴨後，維持填壓速度為3個柱床。
使用adaptor
1 經過上溯填鴨後，關閉柱床下面開關，移開上面的薄膜，小心的加上去離子水進行液封。
2 一定角度插入adaptor，確保沒有氣泡。
3 確保所有的連接都沒有問題，柱子/泵/樣品接受器
4 傾斜插入活塞確保沒有氣泡和管道充滿液體。利用活泵正反向的流動確保沒有氣泡。
5 固定adaptor，打開柱子開關，開始緩沖液的流動。先以填鴨的速度直到柱床穩定後。

固定金屬離子：
金屬螯和柱料通過水來螯和金屬的，避免發生沉澱在膠上。
1 確保柱子已經平衡好。如果有必要可以洗2個柱床（去離子水）
2 選擇金屬離子和0.1-0.3M中弱性酸。例如鐵離子PH 3左右就好，避免形成沉澱和共沉。
3 加入一倍柱床的金屬離子溶液
4 5倍柱床的去離子水洗滌
5 至少2倍柱床的平衡緩沖液
結合：
發生於PH5.5-8.5之間.最強反映發生於最後
初始緩沖液的選擇決定於金屬離子和樣品的結合性質。乙酸鈉或者磷酸鈉是比較好的緩沖液中不能使用EDTA或者檸檬酸鹽
最通用緩沖液：
0.01-0.2M磷酸鈉
0.05M乙酸鈉
強烈推薦加入0.15-0.5M NaCl用於防止離子交換。
通常如果不知道一個蛋白的結合能力，最好的就是使用鋅離子和中性的磷酸或者乙酸鹽，同時含有0.15-0.5M NaCl
去垢劑不會影響蛋白質的結合能力
金屬離子的取代意味著蛋白發生了結合。這種現象可以通過顏色來決定
洗脫蛋白：（3種方法）
1 降低PH(一步或者分步)，大部分蛋白溶解於PH4-6最終3-4是可容的。可選擇檸檬酸鹽，磷酸或者乙酸鹽。
2 逐步提高咪唑的濃度（0-0.5M），梯度變化最好是在初始緩沖液的PH范圍。
3 加入EDTA或者EGTA可洗脫蛋白質。但是不是通用的。
利用離心或者重力作用純化組氨酸位點蛋白
通過上鎳進行選擇性結合含有組氨酸位點蛋白，然後利用含有咪唑的緩沖液洗脫蛋白。

以下的實驗是為了最大化將組氨酸位點蛋白結合到金屬螯和柱料，然後確保能夠洗脫下來。當結合和洗脫的條件尚未明了時，這些方法也是很好用的。
為了獲得高純度的蛋白，必須摸索咪唑的緩沖液在樣品上柱和洗脫時的濃度。通常使用10mM-500mM范圍的咪唑的緩沖液進行剃度洗脫，然後通過收集和SDS-PAGE 蛋白電泳確定洗脫濃度。
為了純化不可容的含有his位點的蛋白質，（包含體），可以在變性條件下進行。利用8M尿素或者6M鹽酸呱進行溶解蛋白。
樣品處理：
樣品要經可能溶解，避免出現堵塞現象，所以可以利用0.45uM慮膜過濾雜志
如果樣品時溶解於20mM磷酸緩沖液中（含有0.5M Nacl,PH7.4），必須調整PH到7－8。
上柱前准備：
洗柱料：
1 親柔震動膠瓶充旋膠料
2 利用吸管吸出足量柱料用以純化目的。每毫升柱料可以吸納5毫克蛋白
3 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
4 小心去除上清
5 加入5倍體積去離子水，充分振盪柱料。可以倒置來回5分鍾，不要機械攪拌。
6 再次500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
7 再次小心去除上清
掛鎳：
1 加入0.5倍柱床體積0.1M硫酸鎳，充分振盪柱料。可以倒置來回5分鍾，不要機械攪拌。
2 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
3 小心去除上清
洗柱：
1加入5倍體積去離子水，充分振盪柱料，來回倒置5分鍾
2 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
3小心去除上清
4 再洗兩次柱料（一共3×5柱床去離子水）
5 最後用一倍體積起始緩沖液充旋柱料（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）

利用離心來純化：
上樣：
1 在起始緩沖液中加入樣品，然後使整體膠濃度達到50％
2 親柔攪拌，室溫離心5－30分鍾，結合能力取決於蛋白和樣品濃度。
3 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
4 取出上清。部分用於SDS-PAGE 蛋白電泳
洗膠：
1 加入5倍體積起始緩沖液，攪拌5分鍾
2 500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
3取出上清。部分用於SDS-PAGE 蛋白電泳
4再洗兩次柱料（一共3×5柱床起始緩沖液）。記得取出上清，部分用於SDS-PAGE 蛋白
電泳
洗柱：
1 加入2倍體積洗脫緩沖液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）攪拌5分鍾
2再次500g 離心2－5分鍾，沉澱柱料。
3再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脫緩沖液）。記得取出上清，部分用於SDS-PAGE 蛋白電泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN
利用流速和重力純化：
1 在柱子底部加上濾器
2 加水排氣
3 加柱帽，去除殘余水。推薦是最多2 Ml柱料就可以了
樣品結合：
1 倒膠進入柱子
2 小心上樣，用波棒室溫攪拌5－30分鍾
3 打開柱帽，收集流出峰用於分析
洗膠：
1 加入5倍體積起始緩沖液，收集流出液用於SDS-PAGE 蛋白電泳
2再洗兩次柱料（一共3×5柱床起始緩沖液）。記得取出上清，部分用於SDS-PAGE 蛋白
電泳
洗柱：
1 加上柱帽，加入2倍體積洗脫緩沖液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）攪拌5分鍾。打開柱帽，收集流出峰
2再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脫緩沖液）。記得取出上清，部分用於SDS-PAGE 蛋白電泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN
注意：0.5M咪唑的280nM吸光值＝0.5
常見問題：
1 樣品太粘稠
答：核酸存在影響，可以繼續超聲，加入RNA酶至10ug/ml DNA酶至5ug/ml。然後冰浴1
0－15分鍾。或者也可以用注射器來回充旋。這樣可以防止堵塞柱料。
2 平衡時樣品洗脫了下來
答: 檢查PH和緩沖液成分，如果緩沖液成分不正確，EDTA加入，強還原劑加入，都會導致這個現象出現。
加大膠的量，如果膠料承載能力過頭，也繪出出現這現象。
准備新鮮的柱料，如果柱料斷裂，也掛不上蛋白。
3 在洗脫液中不含有組氨酸蛋白
答：如果SDS-PAGE 蛋白電泳已經發現蛋白存在於超聲液中
超聲可能不完全。可以用顯微鏡觀察超聲情況。AD260/280比值。（通常是超聲前將10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCL，PH6-8），避免發泡以降解融合蛋白。
蛋白可能是是包含體，可以使用4－6M鹽酸呱或者4－8 M尿素溶解。
尿素溶解的可以進行SDS-PAGE 蛋白電泳，鹽酸呱溶解的不可以進行SDS-PAGE 蛋白電泳，必須換緩沖液。
洗脫液濃度太稀，可以加大咪唑濃度或者降低PH 來決定最佳洗脫條件如果在平衡前的洗柱發現了目的蛋白，證明起始緩沖液中的咪唑濃度太高，可適當降低。
4 考馬氏亮藍或者銀染發現多條帶
答：加入蛋白激酶抑制劑。可能是蛋白降解。用凝血酶切割前必須去除絲氨酸蛋白酶抑制劑採用梯度咪唑來洗脫蛋白。在平衡洗脫液中加入10mM咪唑可以洗脫大量雜質而不會洗脫融合蛋白。低於500mM咪唑可以洗掉絕大部分雜質。
在洗脫步奏往起始緩沖液加入去垢劑（2％TRITON x-100或者2％Tween20）50% 葡萄糖，20mM B-巰基乙醇。記得雜質通常沒有特意結合能力，可以改變緩沖液來洗脫。
如果雜志和目的蛋白有相同結合能力，那就不能用於純化。因此可以使用別的純化系統，例如含有GST尾巴就用谷胱甘肽瓊脂糖4B
柱料再生，清潔和保存
柱料再生：
1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl來洗脫鎳離子。然後用3柱床的0.5M NaCl來洗干凈EDTA
2如果是鐵離子可以用0.05M EDTA泡過夜
3 這一步可以洗脫上面未能洗脫的殘余結合蛋白
清洗柱料：
1 0.5倍柱床2M NaCl，反向洗脫10－15分鍾
2 1M NaOH洗1小時去除殘余蛋白
3 每一步都要用3倍柱床起始緩沖液清洗
4 4倍柱床70%乙醇洗脫強親水蛋白和脂類蛋白。
也可以使用2倍柱床去垢劑。0.1-0.5%非離子去垢劑溶於0.1M乙酸。浸泡1－2小時。最後用5個柱床的70％乙醇去除去垢劑。
清潔：
1 盡可能去除微生物
2 0.5-1M NaOH反向流動半小時
3 再用3－5倍柱床消毒的起始緩沖液平衡
4 這個清潔步奏不一定能夠提高純化能力
保存：
長期保存於20％乙醇或者0.01M NaOH 於4度

Ⅷ 有關蛋白原核表達的文章可以發表在哪些雜志社

如果有抗體，做個western blot判斷下，是雜帶還是降解片段； 如果是雜帶，優先考慮優化你使用的純化方案，如Ni柱，考慮延長washing buffer的時間和提高咪唑濃度，使用解析度更好的填料； 還去不掉，考慮用2步或3步純化，比如用離子交換、凝膠過...

Ⅸ 蛋白純化條件優化 可以投哪些期刊

生物過程，涉及到生物化學的方面

Ⅹ 蛋白分離純化和克隆發什麼國外期刊

對於多個分子生物學和基因組學應用，從克隆和PCR到基因組測序和晶元分析，DNA純化都是必經之路。然而，選擇最佳的純化試劑盒卻並非易事。例如，在您純化基因組DNA時，您需要一個試劑盒，能溫和地處理核酸，同時又不分離質粒DNA。而且，新一代測序技術對樣品的要求頗高，我們也需要一些專門的產品來純化DNA。在此，我們介紹一些新選擇。鹽沉澱方法Epicentre（Illumina旗下公司）的MasterPure™CompleteDNAPurificationKit採用一種專利的鹽沉澱方法。這一系列試劑盒覆蓋各種樣品類型，包括血液、固定組織、植物、酵母、昆蟲等，在短短30分鍾內可帶來高產量的核酸，而損失極少。據Epicentre的資深產品經理CristineKinross介紹，有了這些試劑盒，用戶在測序或其他分子生物學應用的樣品制備之前無需再進行額外的純化。它們可去除蛋白及其他細胞碎片，而不引入那些必須去除的毒性化合物，從而避免了多次洗滌，並改善核酸產量。Kinross談道：「利用MasterPure回收核酸的出色純度讓樣品可直接進入測序文庫的制備。」當然，對於其他應用，包括晶元、qPCR和克隆，它也是適合的。此外，這個試劑盒也能用於RNA的純化。在獲得總的核酸後，經過DNase處理，就能得到總RNA。多種試劑盒Promega提供廣泛的核酸純化試劑盒，採用幾種不同的策略。例如，Wizard®GenomicDNAPurificationKit是基於經典的沉澱法，可從全血、組織培養細胞、動物及植物組織、酵母和細菌中提取基因組DNA，靈活高效；而ReliaPrep™系列試劑盒採用柱提法，簡單快速。此外，Promega還提供基於磁珠純化的試劑盒。Promega公司基因組學的全球產品經理EricVincent表示：「盡管溶液的確切組分會有不同，但裂解、結合、洗滌和洗脫的基本過程適用於不同的結合方法（如硅膠或纖維素），不同的純化形式（純化柱或磁珠），以及手動和自動純化操作。」對於一些非常重要的樣品類型（如FFPE樣品），還需要一些專門的操作或處理。「我們開發了獨特的結合/洗滌緩沖液，它們能有效去除抑制下游反應的物質，而優化的系統讓研究人員能夠捕獲少量的核酸並以小體積（不到30μl）洗脫，我們還開發出自動化的解決方案，適合各種試劑和通量，」Vincent說。這些試劑盒提供了完整的解決方案，能夠以極小的體積洗脫核酸，同時又避免抑制劑殘留在洗脫液中。經過這些試劑盒純化後，核酸可用於PCR、Sanger測序、新一代測序、晶元等下游分析。經典的硅膠膜QIAGEN的核酸純化試劑盒依賴DNA與純化柱上的硅膠膜結合。抑制劑被洗掉，而完整的DNA隨後從柱上洗脫，產量高，純度高，帶來更高質量的新一代測序文庫。MarcoPolidori-QIAGEN樣本制備的全球產品經理-認為，在處理極少量的樣品或困難的樣品如FFPE時，高產量就變得格外關鍵。FFPE樣品所產生的DNA可能會出現「隨機胞嘧啶脫氨」事件，這會導致人為的單核苷酸多態性（SNP）。不過，QIAGEN的GeneReadDNAFFPEKit能夠去除脫氨的胞嘧啶，避免在NGS實驗中產生錯誤的結果。此產品尚未正式推出，若有興趣試用，可填寫資料。「我們的大部分試劑盒都已在NGS應用中得以證明，從循環腫瘤DNA的全基因組測序到微生物組，」Polidori談道。這些試劑盒能讓用戶從各種樣品中獲得高質量的DNA，避免FFPE樣品出現C-T的假象，並在很短的時間內帶來高分子量的DNA。MagAttractHMWDNAkit就能夠利用簡單的磁珠操作，實現100-200kbDNA的純化。整個純化過程溫和去除污染物及抑制劑，並具有極高的產量和純度。離液鹽Sigma-Aldrich公司提供GenElute™，這是基於離液鹽試劑的產品。在含有離液鹽的溶液中，樣品被裂解，以確保大分子的徹底變性。添加乙醇，讓DNA與硅膠膜結合。污染物被洗掉，而DNA被洗脫在Tris緩沖液中。通過專為分離基因組DNA而選擇的硅膠膜，此試劑盒讓用戶能夠從各種樣品中純化高質量的DNA，包括培養的細胞、組織（包括鼠尾）、新鮮的全血或白細胞。據介紹，此試劑盒綜合了硅膠膜結合和微量離心形式的好處，避免了昂貴的樹脂、乙醇沉澱以及有害的有機物，如苯酚、氯仿。更重要的是，它純化所得的DNA可應用於限制性內切酶消化、PCR、Southernblot、測序等。（作者：JamesNetterwald/生物通編譯）