pcr模板是什麼
⑴ 什麼是PCR
PCR：聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一DNA片段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研 究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時便可完成。PCR技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑。
PCR技術簡史
PCR的最早設想 核酸研究已有100多年的歷史，本世紀60年代末、70年代初人們致力於研究基因的體外分離技術，Korana於1971年最早提出核酸體外擴增的設想：「經過DNA變性，與合適的引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，並不斷重復該過程便可克隆tRNA基因」。
PCR的實現 1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。其原理類似於DNA的體內復制，只是在試管中給 DNA的體外合成提供以致一種合適的條件---摸板DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合適的緩沖體系，DNA變性、復性及延伸的溫度與時間。
PCR的改進與完善 Mullis最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的 Klenow片段，其缺點是：①Klenow酶不耐高溫，90℃會變性失活，每次循環都要重新加。②引物鏈延伸反應在37℃下進行，容易發生模板和引物之 間的鹼基錯配，其PCR產物特異性較差，合成的DNA片段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術雖較傳統的基因擴增具備許多突出的優點，但由於 Klenow酶不耐熱，在DNA模板進行熱變性時，會導致此酶鈍化，每加入一次酶只能完成一個擴增反應周期，給PCR技術操作程序添了不少困難。這使得 PCR技術在一段時間內沒能引起生物醫學界的足夠重視。1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶進行PCR，其擴增的DNA片段很均一，真實性也較高，只有所期望的一種DNA片段。但每循環一次，仍需加入新酶。1988年Saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜熱桿菌(thermus aquaticus) 中提取到一種耐熱DNA聚合酶。此酶具有以下特點：①耐高溫，在70℃下反應2h後其殘留活性大於原來的90%，在93℃下反應2h後其殘留活性是原來的 60%，在95℃下反應2h後其殘留活性是原來的40%。②在熱變性時不會被鈍化，不必在每次擴增反應後再加新酶。③大大提高了擴增片段特異性和擴增效 率，增加了擴增長度(2.0Kb)。由於提高了擴增的特異性和效率，因而其靈敏性也大大提高。為與大腸桿菌多聚酶I Klenow片段區別，將此酶命名為Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的發現使PCR廣泛的被應用。
PCR技術基本原理
PCR技術的基本原理 類似於DNA的 天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加 熱至93℃左右一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引 物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：DNA模板--引物結合 物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按鹼基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的「半保留復制鏈」，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需 2～4分鍾，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平台期(Plateau)所需循環次數取決於樣品中模板的拷貝。
PCR的反應動力學 PCR的三個反應步驟反復進行，使DNA擴增量呈指數上升。反應最終的DNA 擴增量可用Y＝(1＋X)n計算。Y代表DNA片段擴增後的拷貝數，X表示平(Y)均每次的擴增效率，n代表循環次數。平均擴增效率的理論值為100%， 但在實際反應中平均效率達不到理論值。反應初期，靶序列DNA片段的增加呈指數形式，隨著PCR產物的逐漸積累，被擴增的DNA片段不再呈指數增加，而進 入線性增長期或靜止期，即出現「停滯效應」，這種效應稱平台期數、PCR擴增效率及DNA聚合酶PCR的種類和活性及非特異性產物的竟爭等因素。大多數情 況下，平台期的到來是不可避免的。
PCR擴增產物 可分為長產物片段和短產物片段兩部分。短產物片段的長度嚴格地限定在兩個引物鏈5』端之間，是需要擴增的特定片段。短產物片段和長產物片段是由於引物所 結合的模板不一樣而形成的，以一個原始模板為例，在第一個反應周期中，以兩條互補的DNA為模板，引物是從3』端開始延伸，其5』端是固定的，3』端則沒 有固定的止點，長短不一，這就是「長產物片段」。進入第二周期後，引物除與原始模板結合外，還要同新合成的鏈(即「長產物片段」)結合。引物在與新鏈結合 時，由於新鏈模板的5』端序列是固定的，這就等於這次延伸的片段3』端被固定了止點，保證了新片段的起點和止點都限定於引物擴增序列以內、形成長短一致的 「短產物片段」。不難看出「短產物片段」是按指數倍數增加，而「長產物片段」則以算術倍數增加，幾乎可以忽略不計， 這使得PCR的反應產物不需要再純化，就能保證足夠純DNA片段供分析與檢測用。
⑵ PCR擴增的模板
RNA做模板就是所謂的反向PCR了。
耐高溫不是聚合酶的通性，聚合酶一般都不耐高溫，所以雖然PCR的思想早就有了，但是因為沒有耐高溫的聚合酶所以才無法付諸實踐，直到後來從水生棲熱菌中發現了Taq才使得PCR被廣泛使用。
⑶ PCR是什麼
聚合酶鏈式擴增反應。
擴增DNA用的。用兩個引物一個模版可以復制一段DNA。
建議參考《分子克隆實驗指南》
PCR診斷技術又叫多聚酶鏈式反應技術，它採用分子技術模擬核酸在體內的復制，從而判定疾病病原的種類，所以從本質上來說，這是一種實驗室診斷方法。目前省內一些科研和檢測機構，如山東省農科院、山東農業大學以及山東省獸醫總站都已經熟練掌握了這項技術。
以往給動物治病，獸醫都是採用看聞問摸的方法，這就要等到動物表現出明顯的症狀，才能初步判定疾病的類型，有時病症復雜了，還得經過很長一段時間的治療性診斷，不僅錯過了治療的最佳時間，還會造成飼料和葯品的浪費。甚至還會出現誤診。而PCR技術就不同了，它不需要觀察動物的外觀表現，所以無論是在潛伏期還是爆發期，只要對動物的相應器官進行檢測，在兩個小時內就能准確判定出畜禽疾病的原因和種類，這就意味著能夠快速治癒爆發的疾病。另外，這項技術也能作為確定某些疾病流行的權威依據。特別是目前其他各種技術都很難確診的病毒病，通過它就可以非常直觀的得出結論。
⑷ pcr技術dna模板如何獲得
有兩種方法：
第一種從cDNA 文庫(cDNA library )獲得，如廈大韓家淮實驗建立的免費cDNA 文庫；
第二種從mRNA逆轉錄獲得，在這種情況下，mRNA的cDNA，與原來的基因組DNA相同而且無內含子；相反地，對應於在原來基因中沒有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上，與外顯子序列、先導序列以及後續序列等一起反映出mRNA結構。
真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA，在遺傳工程方面廣為應用。
(4)pcr模板是什麼擴展閱讀：
cDNA 文庫(cDNA library ): 是指某生物某一發育時期所轉錄的mRNA 全部經反轉錄形成的cDNA 片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。 cDNA 文庫與基因組文庫的最主要的區別是，基因組文庫含有而cDNA 文庫不含非轉錄的基因組序列(重復序列等)。
與基因組文庫- 一樣，cDNA 文庫也是指一群含重組DNA 的細菌或噬菌體克隆。每個克隆只含一種mRNA 的信息，足夠數目克隆的總和包含了細胞的全部mRNA 信息。cDNA 文庫便於克隆和大量擴增，可以從中篩選到所需目的基因，並用於表達。
不論是由細胞總DNA 建立的基因組文庫，還是由mRNA 逆轉錄而成的cDNA 建立的cDNA 文庫，都是混合物，還要對文庫進行篩選，直到獲得目的基因。
以mRNA為模板，經反轉錄酶催化，在體外反轉錄成cDNA，與適當的載體（常用噬菌體或質粒載體）連接後轉化受體菌，則每個細菌含有一段cDNA，並能繁殖擴增，這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細胞的cDNA文庫。
cDNA文庫特異地反映某種組織或細胞中，在特定發育階段表達的蛋白質的編碼基因，因此cDNA文庫具有組織或細胞特異性。
⑸ 什麼是PCR技術PCR的基本原理是什麼
PCR技術是一種用於放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。
PCR技術的基本原理：類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
PCR(聚合酶鏈式反應）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
基於聚合酶製造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。
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PCR引物設計
PCR反應中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條DNA單鏈為基準（常以信息鏈為基準），5′端引物與位於待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位於待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。
引物設計的基本原則
1、引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。
2、引物鹼基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。
3、引物內部不應出現互補序列。
4、兩個引物之間不應存在互補序列，尤其是避免3 ′端的互補重疊。
5、引物與非特異擴增區的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續8個鹼基在待擴增區以外不能有完全互補序列，否則易導致非特異性擴增。
6、引物3『端的鹼基，特別是最末及倒數第二個鹼基，應嚴格要求配對，最佳選擇是G和C。
7、引物的5 ′端可以修飾。如附加限制酶位點，引入突變位點，用生物素、熒光物質、地高辛標記，加入其它短序列，包括起始密碼子、終止密碼子等。
⑹ 什麼是PCR檢測他的原理是什麼需要什麼材料
PCR（聚合酶鏈反應）：類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
基本原理：PCR技術的基本原理類似於DNA的天然復制過程，其特異性主要依賴於和靶序列兩端互補的寡核苷酸引物，它由變性——復性——延伸三個基本反應步驟構成。
所需材料：
模板DNA
正二價鎂離子
引物
反應緩沖液
TAQDNA聚合酶
⑺ 關於做PCR的模板稀釋
博凌科為-為你解答：其實問題不在於模板的量，很微量的模板（十幾納克每微升，甚至更少）就能跑出很好的效果。關鍵是模板裡面不要有抑制PCR反應的 東西
⑻ pcr是什麼材料啊。 模具設計中 定模板有用這種材料么。請詳細介紹下 謝謝！
呵呵，我們生物里的PCR是指聚合酶鏈式反應，用來擴增DNA的...模具設計不懂哎
⑼ 什麼是PCR技術
PCR技術是模擬體內DNA的天然復制過程，在體外擴增DNA分子的一種分子生物學技術，主要用於擴增位於兩段已知序列之間的DNA區段。在待擴增的DNA片段兩側和與其兩側互補的兩個寡核苷酸引物，經變性、退火和延伸若干個循環後，DNA擴增2ⁿ倍。
PCR的每個循環過程包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三個不同的事件：（①變性：加熱使模板DNA在高溫下（94℃左右）雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈；②退火；使溶液溫度降至50~60℃，模板DNA與引物按鹼基配對原則互補結合。
3、延伸：溶液反應溫度升至72℃，耐熱DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，在引物的引導下，利用反應混合物中的4種脫氧核苷三磷酸（dNTP），按5'一3』方向復制出互補DNA。
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【技術原理】
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據鹼基互補配對原則復製成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。
因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，並設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。
但是，DNA聚合酶在高溫時會失活，因此，每次循環都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術的應用和發展。
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對於PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，並逐步應用於臨床。
【工作原理】
類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火（復性）--延伸三個基本反應步驟構成：
①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至90~95℃一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。
②模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至50~60℃，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合。
③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在DNA聚合酶的作用下，於70~75℃，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按鹼基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的「半保留復制鏈」。
而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鍾，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
【工作步驟】
標準的PCR過程分為三步：
1.DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA
2.退火（復性）（40℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。
3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP為原料，從引物的5′端→3′ 端延伸，合成與模板互補的DNA鏈。
每一循環經過變性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。
現在有些PCR因為擴增區很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的時間內復制完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行，以減少一次升降溫過程，提高了反應速度。