甲氨蝶呤文獻
❶ 急求MTX（甲氨蝶呤）核磁氫譜
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❷ 甲氨蝶呤注射液的用法用量
抗腫瘤化療：甲氨蝶呤可採用肌肉、靜脈或鞘內注射給葯。10ml：1000mg 規格的甲氨蝶呤注射液為高滲溶液，禁用於鞘內注射。當用於鞘內注射時，甲氨蝶呤注射液應該用適當的不含防腐劑的溶劑如 0.9%氯化鈉注射液稀釋至1mg/ ml 的濃度。對於轉換mg/kg 體重至mg/m2 體表面積或反之，指南推薦1：30 的比例。根 據年齡和體格的不同選擇的轉換系數范圍在1：20 與1：40 之間。絨毛膜癌及類似滋養細胞疾病：常規劑量是15－30mg/日，肌注5 天。通常 一至數周後，在所有毒性反應全部消失後，再開始下一個療程。通常需要3-5 個 療程。治療的療效可採用24 小時尿HCG(人絨毛膜促性腺激素)定量分析進行評 估。在第三或第四療程後，HCG 水平應回到正常或低於50IU/24h。可測量病灶通 常在4－6 周後可完全消除。HCG 水平恢復正常後，建議繼續給予1 或2 個療程 甲氨蝶呤的治療。每個療程開始前，必須進行詳細的臨床評估。甲氨蝶呤可與其它抗腫瘤葯 物聯合使用。乳腺癌：對於淋巴結陽性的早期乳腺癌患者，作為乳腺癌根治術後的輔助治 療，甲氨蝶呤聯合環磷醯胺、氟尿嘧啶進行長期周期性化療可取得較好的療效。 甲氨蝶呤的劑量為40mg/m[sup]2[/sup]，於第一天和第八天靜脈給葯。白血病：兒童和青少年急性淋巴細胞性（淋巴母細胞性）白血病患者對目前 的化療反應性最強。青年和老年患者更難獲得臨床緩解，早期復發比較常見。在 慢性淋巴細胞性白血病中，化療敏感性不佳。甲氨蝶呤單用或與類固醇聯用最初 用於淋巴母細胞性白血病的誘導緩解治療。近年來，皮質類固醇與其它抗白血病 葯物或者與包括甲氨蝶呤在內的聯合用葯方案多周期治療，能引起迅速而有效的 緩解。當用於誘導緩解治療時，甲氨蝶呤給葯劑量為3.3 mg/m[sup]2[/sup]/日聯合潑尼松 60 mg/m[sup]2[/sup]/日。50％接受治療的患者一般在4 到6 周內緩解。對急性髓細胞性白血病化療不敏感.甲氨蝶呤單用或與其它葯物合用，可選擇用於鞏固維持治療。當獲得緩解並 且支持治療改善了臨床一般狀況之後可以開始維持治療，用法為本品 30mg/m[sup]2[/sup] 每周 兩次肌肉注射，或者每14 天2.5 mg/kg 靜脈內給葯。當出現復發時，重復最初的 誘導方案可以再次獲得緩解。腦膜白血病：白血病患者有中樞神經系統受侵犯的傾向。可以有特徵性的症狀和體征，或 者一直沒有症狀和體征僅通過腦脊液檢查找到白血病細胞而被診斷。因此，應該 檢查所有白血病患者的腦脊液。由於從血清中進入腦脊液中的甲氨蝶呤的量極 少，因此為獲得充分的治療本品應該鞘內給葯。如今作為淋巴細胞性白血病的預防性治療，甲氨蝶呤鞘內給葯是一種常用的 治療方法。鞘內注射能使甲氨蝶呤分布於腦脊液中，其用量根據年齡而不是體表面積。 初生兒的腦脊液約相當於成人的40%，數年之後可達到成人水平。根據年齡推薦 的劑量如下：1 歲以下 6mg1 歲 8mg2 歲 10mg3 歲及3歲以上 12mg對70 歲或70 歲以上的成人，以及小於四個月的嬰兒，毒性可能會增加， 因此可適當減量。給葯應間隔2－5 天，有些適應症所給劑量間隔少於一周可能導致毒性增 加。可持續使用甲氨蝶呤直至腦脊液中的細胞總數恢復正常，隨後建議再給一次甲氨蝶呤。有關腦膜白血病的預防，醫生應查閱醫學文獻。甲氨蝶呤經鞘內注射途徑給葯可在循環系統中大量出現，引起全身甲氨蝶 呤毒性反應。因此應適當調整、減少或停用全身抗白血病治療葯物。用於鞘內注射，甲氨蝶呤注射液應該用適當的無防腐劑溶劑如0.9%氯化鈉 注射液稀釋。稀釋後濃度為1mg/ml。大劑量甲氨蝶呤可致驚厥和其它難以處理的副作用，主要表現在神經系統。 鞘內化療可能對累及中樞神經系統的局灶性白血病沒有療效，最好的方法是 給予放射治療。淋巴瘤III 期淋巴肉瘤可能對含甲氨蝶呤0.625-2.5 mg/kg/日劑量的聯合治療有效。 霍奇金病對甲氨蝶呤和大多數化療緩解率低。蕈樣黴菌病：甲氨蝶呤50mg 每周一次或25mg 每周二次肌注，可以做為口服 療法的替代方法。大劑量療法：參見注意事項，給葯方案可根據病史、疾病的嚴重程度以及醫 師的臨床經驗加以調整。大劑量給葯方案只能在具備充分設備處理不良反應的條 件下，由有資質的專家執行。銀屑病化療：治療銀屑病的給葯方案主要依據病情的性質和嚴重程度及醫師 自身的經驗而定。應事先告知患者所有可能的危險，並在治療過程中持續監測患者情況。對腎 功能、肝功能和血液成分的評估應該有歷史記錄。在甲氨蝶呤開始治療之前、治 療期間定期的以及間隔一段時間後重新開始本品治療之前都需要進行體格檢查 和實驗室檢查（例如全血細胞計數、尿檢驗、血清肌酐測定、肝功能測定以及必 要時行肝臟穿刺活檢）。在接受和結束甲氨蝶呤治療後至少3 個月內應該採取適 當的措施避孕。依據每周胃腸外間歇性大劑量用法制定常用注射劑量計劃表。計劃表應該針對個體患者不斷調整。下述引用的劑量計劃表適用於平均體重 70kg 的成年人。推薦在開始治療前的一周使用初始嘗試劑量來檢測任何特異體 質。建議胃腸外給葯的劑量范圍是5-10 mg。推薦起始劑量每周肌肉或靜脈注射單葯給葯方案：每周10-25 mg 直到出現適當的療效。 在這個劑量計劃表中，劑量一般不能超過50mg/周。要逐漸調整劑量以達到最佳的臨床療效，但在每個療程中都不能超過最大劑 量。一旦出現最佳臨床療效，劑量計劃表應該減到可能的最低劑量和最長的休息 間期。應該鼓勵甲氨蝶呤的使用可以恢復常規的局部治療。
❸ 甲氨蝶呤是不是醫保用葯
是的，方法名稱： 甲氨蝶呤原料葯－甲氨蝶呤－高效液相色譜法
應用范圍： 本方法採用高效液相色譜法測定甲氨蝶呤原料葯中甲氨蝶呤的含量。
本方法適用於甲氨蝶呤原料葯。
方法原理： 供試品經流動相溶解並定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長302nm處檢測甲氨蝶呤的峰面積，計算出其含量。
試劑： 1. 乙腈
2. 7.0%枸櫞酸溶液
3. 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按甲氨蝶呤峰計算應不低於1000。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：乙腈 7.0%枸櫞酸溶液 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液=10 10 80
2.2 檢測波長：302nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 對照品溶液的制備
精密稱取甲氨蝶呤對照品適量，加流動相溶解並定量稀釋成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對照品溶液。
2.供試品溶液的制備
精密稱取供試品適量，加流動相溶解並定量稀釋成每1mL中約含甲氨蝶呤0.1mg的溶液，即為供試品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器於波長302nm處測定甲氨蝶呤（C20H22N8O5）的峰面積，計算出其含量。
參考文獻： 中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005版，一部，p.120。
❹ 甲氨蝶呤片的兒童用葯
未進行該項實驗且無可靠參考文獻。
❺ 跪求大神指點甲氨蝶呤（Methotrexate）的合成中搜索之前參考文獻
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❻ 甲氨蝶呤注射液的禁忌
有以下情況時禁用甲氨蝶呤●患銀屑病的孕婦；●哺乳期婦女；●有嚴重肝功能不全的銀屑病患者；●有嚴重腎功能不全的患者；●有酒精中毒或酒精性肝病的銀屑病患者；●有明顯的或實驗室檢查證實的免疫缺陷患者；●有骨髓抑制或已存在血惡液質的銀屑病患者，如骨髓發育不全、白細胞減少、 血小板減少或貧血；●存在嚴重感染的銀屑病患者；●已知對甲氨蝶呤或任何輔料過敏的患者；●有消化性潰瘍病或潰瘍性結腸炎的銀屑病患者；●接受中樞神經系統放療的患者不應同時接受甲氨蝶呤鞘內注射；警告甲氨蝶呤只能由有抗代謝葯物化療經驗的內科醫生使用，如果是非腫瘤的 情況則必須由專業的內科醫生使用。因為有致命或嚴重的毒性反應的可能，內科醫生必須充分告知患者存在的 風險，並且應該在其監督下用葯。有使用甲氨蝶呤後死亡的報道。在治療銀屑病時甲氨蝶呤僅限用於對其它治療方式療效不明顯的嚴重、頑固和致殘性病例，並且只能在組織活檢和/或適當會診明確診斷後使用。1. 甲氨蝶呤可以引起顯著的骨髓抑制、貧血、再生障礙性貧血、白細胞減少、 中性粒細胞減少、血小板減少和出血。2. 甲氨蝶呤可能具有肝臟毒性，特別是在大劑量或長時間治療的情況下。曾 報道有肝萎縮、肝壞死、肝硬化、脂肪變性和門靜脈周圍纖維化。由於這 些反應可以在沒有胃腸道或血液學毒性的預兆下發生，所以必須在治療開 始前評估肝功能，並且在治療的過程中定期監測。在已有肝細胞損害或肝 功能受損的情況下要特別注意。必須避免同時使用其它有潛在肝臟毒性的 葯物（包括酒精）。3. 甲氨蝶呤停葯後惡性淋巴瘤可能消退，上述情況可發生在接受低劑量甲氨 蝶呤治療的患者中，這些患者可能不需要細胞毒葯物治療，應首先停止使 用甲氨蝶呤，如果淋巴瘤沒有消退須制定適當的治療方案。4. 潛在的致死性的機會性感染，特別是卡氏肺囊蟲性肺炎，可以發生在甲氨 蝶呤治療過程中。5. 使用甲氨蝶呤的同時進行放射治療可能會增加軟組織壞死和骨壞死的風 險。6. 腎功能損害是常見的禁忌症。7. 腹瀉和潰瘍性口腔炎是常見的毒性反應，需要中斷治療。此外也可能發生 出血性腸炎和致死性的腸穿孔。8. 曾有報道輸注甲氨蝶呤（通常為大劑量）的同時使用非甾體類抗炎葯 （NSAIDs）後出現不可預知的嚴重的（有時是致死的）骨髓抑制、再生障 礙性貧血和胃腸道毒性9. 甲氨蝶呤誘發的肺部疾病，包括急性或慢性的間質性肺炎是一種潛在的危險 損害，有報道在低劑量用葯時它們可能急性發作於治療的任何時期。這種 損傷並不都是完全可逆的，並且有因此死亡的報道。如出現肺部症狀（尤 其是無痰性乾咳、呼吸困難）可能需要中斷治療並且給予仔細的檢查。肺 部損傷在任何劑量下甚至低至每周7.5mg 劑量都會發生。需要排除感染（包 括肺炎）。需要密切監測患者的肺部症狀。10. 大劑量甲氨蝶呤結合亞葉酸（葉酸鈣）解救用於特定的腫瘤性疾病的實驗 性治療。上述操作程序尚在研究中並且是危險的。在沒有必要的專業技術 和資源組合的設施下不能嘗試使用大劑量甲氨蝶呤。有必要查閱最新發表 的文獻。
❼ 甲氨蝶呤注射液的葯物過量
第一次出現潰瘍或出血，腹瀉或造血功能顯著抑制時應停用甲氨蝶呤。在口服過量之後常見的症狀包括葯理學劑量水平出現的症狀和體征，顯著 的是血液系統和胃腸道的反應，例如白細胞減少、血小板減少、貧血、全血細胞 減少、骨髓抑制、粘膜炎、口腔潰瘍、惡心、嘔吐、胃腸道潰瘍和胃腸道出血。 曾報道在一些病例中沒有出現症狀。有葯物過量致死的報道。在這些病例中，不 良事件如敗血症或敗血症性休克、腎功能衰竭和再生障礙性貧血也曾被報道。致 命的毒性症狀有厭食，進行性體重減輕，血性腹瀉、白細胞減少，抑鬱和昏迷。一旦發現甲氨蝶呤不慎過量，要盡快給與亞葉酸鈣（亞葉酸），每6 個小 時10 mg/m[sup]2[/sup] 靜脈或肌肉注射給葯直到血清甲氨蝶呤濃度低於10[sup]-2[/sup] M。如果存在 胃瀦留或梗阻，應該通過胃腸外途徑給予亞葉酸。同時進行水化(3 L/d)並且用碳 酸氫鈉鹼化尿液。調整碳酸氫鈉的劑量使尿PH 值大於等於7。應該間隔24 小 時分析血清樣本中肌酐和甲氨蝶呤的水平。如果24 小時血清肌酐水平在基線上 增長了50％或者如果24 小時甲氨蝶呤水平大於5 x 10[sup]-6[/sup]M 或48 小時甲氨蝶呤水 平大於等於9 x 10[sup]-7[/sup] M，那麼亞葉酸鈣的劑量應該增加到100 mg/m[sup]2[/sup] 每3 小時靜 脈注射直到甲氨蝶呤水平[10[sup]-8[/sup] M。亞葉酸鈣輸注的速度不能超過每分鍾16.0 mL (160 mg 亞葉酸鈣)。有明顯第3 間隙蓄積的患者具有高風險，不論他們24 小時 血清甲氨蝶呤水平如何都要持續監測直到血清甲氨蝶呤水平小於10[sup]-8[/sup] M。以上所提到的亞葉酸鈣的劑量並不適用於大劑量甲氨蝶呤治療中。在不同 的研究和發表的文獻中亞葉酸鈣的劑量有所不同，建議參考發表的有關大劑量甲 氨蝶呤用葯的文獻。無論是標準的血液透析或者腹膜透析都不能明顯改善甲氨蝶呤的清除。如 果患者完全無尿，那麼通過血液透析可能會清除部分甲氨蝶呤，此外也沒有其它 可以選擇的治療手段。有報道使用高通量透析器進行急性間斷性血液透析對甲氨 蝶呤的清除是有效的。
❽ 甲氨蝶呤注射液的不良反應
甲氨蝶呤的主要毒性反應發生在正常和增殖迅速的組織，特別是骨髓和胃腸 道。口腔粘膜潰瘍通常是毒性反應的最早期症狀。最常見的不良反應包括潰瘍性 口腔炎、白細胞減少、惡心和腹部不適。其它有不適、疲勞、寒戰發熱、頭痛、 頭暈、睏倦、耳鳴、視力模糊、眼睛不適和對感染抵抗力下降。一般而言，不良 反應的發生率和嚴重性與用葯的劑量和頻率有關。不同系統的不良反應報道如 下：● 皮膚和超敏反應：皮炎、紅斑疹、瘙癢、蕁麻疹、光過敏、色素減退/色素沉 著、脫發、脈管炎、瘀點、瘀斑、毛細血管擴張、痤瘡、毛囊炎、癤病和指 甲改變。每次給葯後銀屑病病灶可能會出現持續1 至2 天的發燙和紅斑。同 時接受紫外線照射會使銀屑病所致的皮損加重惡化。有報道銀屑病患者出現 皮膚潰瘍，並且有少數類過敏反應的報道。放射性皮炎和曬斑可能會重新出現。曾報道甲氨蝶呤用葯後幾天內兒童和成年患者發生嚴重的、偶爾致死的皮膚 反應，包括中毒性表皮壞死溶解、斯-約二氏綜合征(Steven-Johnson Syndrome)、剝脫性皮炎、皮膚潰瘍/壞死和多形性紅斑。腫瘤和非腫瘤患者 在接受單劑量或多劑量甲氨蝶呤治療後上述毒性反應顯著。● 血液和淋巴系統：骨髓抑制、白細胞減少、中性粒細胞減少、血小板減少、 血清白蛋白下降、貧血（包括再生障礙性貧血）、嗜酸性粒細胞增多、全血 細胞減少、粒細胞缺乏、低丙種球蛋白血症、淋巴結病和增生異常。可能會 出現下列臨床表現如發熱、感染、不同部位的出血和敗血病。也有報道發生 巨幼紅細胞性貧血，主要發生在長期接受甲氨蝶呤治療的老年患者。連續甲 氨蝶呤治療時應允許補充葉酸以減輕貧血。● 胃腸道：粘膜炎（牙齦炎、咽炎、口腔炎、舌炎），食慾減退，惡心，嘔吐， 腹瀉，腹部不適，嘔血，黑便，胃腸道潰瘍與出血，腸穿孔，腸炎，急性和 慢性肝細胞毒性導致的急性肝萎縮、壞死、脂肪變性、急性肝炎、門靜脈周 圍纖維化、肝硬化、胰腺炎、肝酶升高、血清白蛋白下降和肝功能衰竭。甲 氨蝶呤對腸粘膜的損傷極少會導致吸收不良或中毒性巨結腸。常有肝功能檢 查結果改變（轉氨酶和LDH 水平升高）的報道，但是一般停葯後一個月內恢復。● 泌尿生殖系統：腎功能衰竭、排尿困難、氮質血症、膀胱炎、血尿、卵子產 生或精子發生缺陷、暫時性少精液症、泌尿生殖器或月經異常、不育症、流 產、胎兒畸形、死胎、嚴重的腎病、陰道炎、陰道溢液。● 心血管系統：心包炎、脈管炎、心包積液、低血壓和血栓事件（包括動脈血 栓形成、腦血栓形成、深靜脈血栓形成、視網膜靜脈血栓形成、血栓性靜脈 炎和肺動脈栓塞）。● 神經系統：報道有頭痛、睏倦、視力模糊、嗜睡、運動功能障礙、顱神經麻 痹、白質腦病、腦病及昏迷。鞘內注射後可能會出現失語症、輕偏癱、局部 麻痹、驚厥及格林 -巴利綜合征和腦脊液壓力增加。低劑量用葯後，偶有患 者出現暫時的精細認知障礙、情緒改變或罕見顱骨感覺障礙的報道。有報道 接受鞘內注射甲氨蝶呤同時頭顱照射的患兒出現認知缺損。有報道接受顱脊 椎照射的患者靜脈內輸注大劑量甲氨蝶呤後出現白質腦病。在鞘內注射或大劑量使用甲氨蝶呤後，可能發生的中樞神經系統毒性分類如 下：(1)化學性蛛網膜炎，表現為頭痛、背痛、項強直和發熱；(2) 一般為暫 時性的局部麻痹，表現為截癱和CSF 壓力增高累及一個或多個脊神經根；(3) 治療後數月至數年可出現一種遲發綜合症，其特徵為壞死性白質腦病，表現 為意識錯亂、木僵、易怒、嗜睡、共濟失調、痴呆、偶爾和罕見的驚厥發作 和死亡。上述反應均與劑量相關，而且當鞘內注射甲氨蝶呤劑量超過50mg 並 聯合頭顱照射及全身甲氨蝶呤治療時容易發生。● 肺部：有報道出現間質性肺炎導致的死亡、間質纖維化和可逆性肺部嗜酸細 胞浸潤症，偶爾有慢性間質性阻塞性肺疾病和肺泡炎發生。甲氨蝶呤引起的 肺部毒性通常表現為：發熱、咳嗽（特別為無痰乾咳）、呼吸困難、胸痛、 低氧血症和/或肺部浸潤的放射學依據（通常為彌漫性和/或蜂窩狀）。● 眼部：結膜炎、不明原因的嚴重視力改變，包括短暫失明。● 致癌性：在人類有報道細胞毒葯物與第二腫瘤發生風險的增加有關。有文獻 報道接受甲氨蝶呤治療的患者可患淋巴瘤包括可逆性淋巴瘤和腫瘤溶解綜合症。有證據表明使用甲氨蝶呤後出現動物體細胞和人類骨髓細胞染色體破 壞。● 感染：曾有報道因腫瘤和非腫瘤疾病而接受甲氨蝶呤治療的患者出現致死性 的機會性感染。卡氏肺囊蟲性肺炎是最常見的一種感染。其它報道的感染包 括肺炎、敗血症、諾卡氏菌病、組織胞漿菌病、隱球菌病、帶狀皰疹、單純 皰疹病毒性肝炎、彌散性單純皰疹、致死性敗血症和巨細胞病毒包括巨細胞 病毒性肺炎。● 其它：其它曾報道與使用甲氨蝶呤相關的或由甲氨蝶呤引起的反應有代謝改 變、糖尿病加重、骨質疏鬆（包括股骨頭無菌性壞死）、組織細胞異常改變、 關節痛/肌痛、蛋白尿、結節病、應力性骨折、性慾減弱、陽痿甚至猝死。
❾ 甲氨蝶呤會使人發胖嗎
甲氨蝶呤為抗葉酸類抗腫瘤葯，主要通過對二氫葉酸還原酶的抑制而達到阻礙腫瘤細胞的合成，而抑制腫瘤細胞的生長與繁殖。
葯物分析
方法名稱： 甲氨蝶呤原料葯－甲氨蝶呤－高效液相色譜法
應用范圍： 本方法採用高效液相色譜法測定甲氨蝶呤原料葯中甲氨蝶呤的含量。
本方法適用於甲氨蝶呤原料葯。
方法原理： 供試品經流動相溶解並定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長302nm處檢測甲氨蝶呤的峰面積，計算出其含量。
試劑： 1. 乙腈
2. 7.0%枸櫞酸溶液
3. 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按甲氨蝶呤峰計算應不低於1000。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：乙腈 7.0%枸櫞酸溶液 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液=10 10 80
2.2 檢測波長：302nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 對照品溶液的制備
精密稱取甲氨蝶呤對照品適量，加流動相溶解並定量稀釋成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對照品溶液。
2.供試品溶液的制備
精密稱取供試品適量，加流動相溶解並定量稀釋成每1mL中約含甲氨蝶呤0.1mg的溶液，即為供試品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器於波長302nm處測定甲氨蝶呤（C20H22N8O5）的峰面積，計算出其含量。
參考文獻： 中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005版，一部，p.120。
❿ 甲氨蝶呤的葯物分析
方法名稱： 甲氨蝶呤原料葯－甲氨蝶呤－高效液相色譜法
應用范圍： 本方法採用高效液相色譜法測定甲氨蝶呤原料葯中甲氨蝶呤的含量。
本方法適用於甲氨蝶呤原料葯。
方法原理： 供試品經流動相溶解並定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長302nm處檢測甲氨蝶呤的峰面積，計算出其含量。
試劑： 1. 乙腈
2. 7.0%枸櫞酸溶液
3. 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按甲氨蝶呤峰計算應不低於1000。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：乙腈 7.0%枸櫞酸溶液 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液=10 10 80
2.2 檢測波長：302nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 對照品溶液的制備
精密稱取甲氨蝶呤對照品適量，加流動相溶解並定量稀釋成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對照品溶液。
2.供試品溶液的制備
精密稱取供試品適量，加流動相溶解並定量稀釋成每1mL中約含甲氨蝶呤0.1mg的溶液，即為供試品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器於波長302nm處測定甲氨蝶呤（C20H22N8O5）的峰面積，計算出其含量。
參考文獻： 中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005版，一部，p.120。